摘要
安捷倫高效液相色譜柱清洗注意事項
內(nèi)容
安捷倫高效液相色譜柱清洗注意事項
第一、安捷倫的色譜柱有很多種，所以要分清類型去沖洗。
第二、作為普通C18柱，尤其是硅膠基質(zhì)的普通C18柱，對酸堿鹽以及水，都是造成柱子的損壞的流動相構(gòu)成。水不能過多（除了帶AQ的純水柱，一般各家品牌都有這款防水柱）我個人認為只要超過80%的水的流動相，都會造成C18的壽命縮短。所以做高水相的流動相分析時請注意選合適的柱子。酸對柱子的損傷是不可逆的，一定要控制PH，我個人認為PH在2以下的都要做好費柱子的準備。堿性條件是對于硅膠基質(zhì)的C18的弱項，一般的硅膠基質(zhì)的C18堿性條件都不太耐用，但現(xiàn)在也有堿性PH11的柱子，但比較貴。鹽對色譜柱的影響主要是鹽析造成的，而且是致命。
第三沖洗方法的問題。沖洗方法根據(jù)使用的流動相和樣品的不同沖洗方法要加以區(qū)分。一般不加酸堿鹽，水相也不高的情況（如甲醇水60:40），無需太過沖洗，沖洗的目的就是為了把樣品的雜質(zhì)沖出即可。保存流動相保存即可。酸和堿的條件下，原則上是將酸堿沖出色譜柱，保存在甲醇水即可（如60:40比例可根據(jù)要使用的流動相，只要水相不高即可）。鹽的條件比較麻煩，處理不好，不僅僅色譜柱出問題而且儀器也比較麻煩。常用的就是高水相流動相甲醇-水（10：90）將鹽沖出（注意壓力），然后用純甲醇沖洗（這一步是恢復(fù)高水相對色譜柱的損傷），最后保存在一般的甲醇水體系即可。
第四點，沖洗的時候注意是壓力，最好是從小流速開始慢慢提升流速到壓力許可的范圍。沖洗的時間，大家都有個誤區(qū)就是沖洗時間用分鐘或小時計算是不準確，準確的是流量一般色譜柱的沖洗都要達到10-20倍的柱體積。
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